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FastTaqMan Mixture(With ROX)說明書
點擊次數(shù):987 更新時間:2021-11-30

  

FastTaqMan MixtureWith ROX)說明書

 

Cat. No.   K2390

保存:-20℃避光

 

如需頻繁使用,2-8℃保存,盡量避免反復(fù)凍融。

 

組分說明

 

                          2×FastTaqMan Mixture

 Cat. No.     Kit Size                                          RNase-Free WaterWith ROX

 

K2390     50 μl 反應(yīng)×40 次(1 ml)  1 ml                      1 ml

 

K2390A   50 μl 反應(yīng)×200 次(5 ml5×1 ml                 5 ml

 

產(chǎn)品簡介

 

    FastTaqMan Mixture(With ROX)是專用于探針法(TaqMan,Molecular Beacon 等)實時熒光定量 PCR 的預(yù)混體系,濃度為 2×,包含 Fast Taq DNA Polymerase、PCR BufferdNTPs、Mg 2+ ROX 校正染料,操作簡單方便。主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉(zhuǎn)錄后的 cDNA 靶序列檢測。本品含有的 Fast Taq DNA Polymerase,能有效減少在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚體而產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增,酶的激活僅需在 95℃孵育 30s。整個 PCR 反應(yīng)過程比普通反應(yīng)可節(jié)省約 40 分鐘,大大縮短了 PCR 的反應(yīng)時間。*的 PCR 緩沖體系與快速熱啟動酶的組合,有效抑制了非特異產(chǎn)物的產(chǎn)生,并顯著提高了 PCR 的擴(kuò)增效率,熒光信號更強,靈敏度更高,線性范圍更寬。該產(chǎn)品適用范圍廣,可用于普通和快速定量 PCR 程序。所含的 ROX 染料可校正定量 PCR 儀孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差, 適用于以 ROX 作為校正染料的熒光定量 PCR 儀。

 

注意事項

 

1     使用前請上下顛倒輕輕混勻,盡量避免起泡,并經(jīng)短暫離心后使用。

 

2     本產(chǎn)品中含有熒光染料 ROX,保存本產(chǎn)品或配制 PCR 反應(yīng)液時應(yīng)避免強光照射。

 

3     避免反復(fù)凍融本品,反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。本產(chǎn)品長期保存可置于-20℃,避光。如果在短期內(nèi)需要頻繁使 用,可在 2-8℃保存。  

 

使用方法

 

以下舉例為常規(guī)的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小的不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

 

1.   PCR反應(yīng)體系:

 

試劑                            50 μl反應(yīng)體系     終濃度

 

2×FastTaqMan MixtureWith ROX)    25 μl                    1×

 

Forward Primer,10 µM                      1μl                0.2 μM 1

Reverse Primer10 µM                       1μl                 0.2 μM   1

Probe,10  μM                                 1μl                0.2  μM  2

Template DNA                                    2 μl 3

 

RNase-Free Water                             up to 50  μl

 

     注意:1)通常引物濃度以0.2  μM可以得到較好結(jié)果,可以在0.1-1.0 μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;

發(fā)生非特異性反應(yīng)時,可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

2)所用探針的終濃度,與使用的熒光定量PCR儀、探針種類、熒光標(biāo)記物質(zhì)種類有關(guān),實際使用時請參照儀器說明書,或各熒光探針的具體使用要求進(jìn)行濃度的調(diào)節(jié)。

3)通常DNA模板的量以10-100 ng基因組DNA1-10 ng cDNA為參照,因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同,可對模板進(jìn)行梯度稀釋,以確定最佳的模板使用量。

 

2.   PCR反應(yīng)程序:

 

     兩步法PCR

 

步驟                     溫度               時間

 

預(yù)變性                    95℃              30 s  1

 

變性                     95℃              5 s       

                                            35-40 個循環(huán)

退火/延伸       2)        60℃              30 s

 

     注意:1)本產(chǎn)品所采用的酶須在預(yù)變性95℃、30s條件下實現(xiàn)酶的活化。在此條件下,大多數(shù)模板可良好的進(jìn)行解鏈。對GC含量高、二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的模板,可將預(yù)變性時間延長至14分鐘,以使起始模板充分解鏈。

2)建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序,若因使用Tm值較低的引物等原因,得不到良好的實驗結(jié)果時,可嘗試進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增,退火溫度請以  56-64℃的范圍作為設(shè)定參考。


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