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加A試劑盒說明書
點擊次數(shù):2782 更新時間:2015-05-18

 

加A試劑盒說明書

 

A-Tailing Kit

加A試劑盒

目錄號:YJ0803

 

 

保存條件:-20℃保存。

 

組分說明

 

                    Cat. No.                       YJ0803

                    Size                             20次

                    A-Tailing Enzyme(5 U/μl)         25 μl

                    10×A-Tailing Buffer             120 μl

                    dATP,2 mM                        25 μl

 

 

本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

                                                

 

    產(chǎn)品簡介

 

      利用具有3’-5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶,如Pfu等進(jìn)行PCR擴(kuò)增時,其PCR產(chǎn)物為不帶  A尾的平末端  DNA片段,如想將該片段克隆到     T載體上,需要先利用A-Tailing  Enzyme在平末端片段后加上A尾后才能與T載體上3’末端的T堿基互補(bǔ)連接。

    本產(chǎn)品是在平末端 DNA片段的3’末端添加一個A尾,使平末端的 DNA片段進(jìn)行TA克隆

成為可能。本試劑盒提供了加A尾需要的所有成分,可以在30分鐘完成整個過程。與平

    末端DNA片段克隆相比,TA克隆具有較高的克隆效率,可大大提高實驗成功率。

 

    使用方法

 

    1.將平末端PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化,若 PCR無非特異擴(kuò)增可用 DNA產(chǎn)物回收試劑盒進(jìn)行純化,若 PCR產(chǎn)物有非特異性擴(kuò)增可用膠回收純化試劑盒進(jìn)行純化。

    2.將以上純化好的平末端DNA片段按以下反應(yīng)體系加A尾:

 

                           試劑                      10 μl體系

                           平末端 DNA片段             X μl(<1 μg)

                           dATP                       1 μl 

                           10×A-Tailing Buffer        1 μl 

                           A-Tailing Enzyme           1 μl 

                           RNase-Free Water       補(bǔ)足至 10 μl 

 

    3.輕輕混勻后72℃孵育30 min。

 

       注意:加A尾的產(chǎn)物可以不需要再次純化,可直接用于連接反應(yīng)。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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